ערכת PCR בזמן אמת של וירוס קופים
פרטי מוצר
שימוש מיועד
הוא משמש לזיהוי של וירוס אבעבועות רוח בדגימות סרום אנושי או נגעים באמצעות מערכות PCR בזמן אמת.
עקרון הבדיקה
מוצר זה הוא מערכת בדיקת PCR בזמן אמת המבוססת על בדיקה פלורסנטית Taqman®.פריימרים ובדיקות ספציפיות מיועדים לזיהוי הגן F3L של נגיף אבעבועות רוח.בקרה פנימית המכוונת לגן הנשמר מפקח על איסוף הדגימות, טיפול בדגימות ותהליך PCR בזמן אמת כדי למנוע תוצאות שליליות שגויות.הערכה היא מערכת ליופיליזית מראש תערובת מלאה, הכוללת חומרים הדרושים לזיהוי וירוס קופים: אנזים הגברה של חומצת גרעין, אנזים UDG, חוצץ תגובה, פריימר ובדיקה ספציפיים.
תוכן עיקרי
הרכיבים שסופקו מפורטים בטבלה.
| רכיבים | חֲבִילָה | מַרכִּיב |
| וירוס אבעבועות הקופיםPremix ליאופיליזציה | 8 צינורות PCR× 6 שקיות | פריימרים, בדיקות, מיקס dNTP/dUTP, Mg2+, Taq DNA פולימראז, אנזים UDG |
| MPV בקרה חיובית | צינור 400 μL×1 | רצפי DNA המכילים גן מטרה |
| MPV בקרה שלילית | צינור 400 μL×1 | רצפי DNA המכילים מקטע גנים אנושיים |
| תמיסה ממיסה | צינור 1 מ"ל × 1 | מְיַצֵב |
| תעודת התאמה | 1 חתיכה | / |
מבצע זרימה
1. מדגםאוסף:יש לאסוף את הדגימה לצינורות סטריליים בהתאם
עם מפרט טכני סטנדרטי.
2. הכנת ריאגנטים (אזור הכנת ריאגנטים)
הוצא את רכיבי הערכה, איזון אותם בטמפרטורת החדר לשימוש בהמתנה.
3. עיבוד דגימות (אזור עיבוד דגימות)
3.1 מיצוי חומצת גרעין
מומלץ לקחת דגימות נוזליות של 200μL, בקרה חיובית ובקרה שלילית למיצוי חומצת גרעין, בהתאם לדרישות והנהלים התואמים של ערכות מיצוי DNA ויראלי.
3.2 המסת אבקה ליאופילית והוספת תבנית
הכן תערובת מקדימה של וירוס Monkeypox וירוס לפי מספר הדגימות.דגימה אחת זקוקה לשפופרת PCR אחת המכילה אבקת קדם-מיקס ליאופיליזית.יש להתייחס לבקרה שלילית ובקרה חיובית כאל שתי דגימות.
(1) הוסף 15μL תמיסה להמסה לכל צינור PCR המכילה תערובת מקדימה ליאופיל, ולאחר מכן הוסף 5μL דגימות שחולצו/בקרה שלילית/בקרה חיובית לכל צינור PCR בהתאמה.
(2) כסו היטב את צינורות ה-PCR, העבירו את צינורות ה-PCR ביד עד שהאבקה הליופיליזית נמסה לחלוטין ומתערבבת, אסוף את הנוזל לתחתית צינורות ה-PCR על ידי צנטריפוגה מיידית במהירות נמוכה.
(3) אם משתמשים במכשיר PCR נפוץ בזמן אמת לזיהוי, העבירו ישירות צינורות PCR לאזור ההגברה;אם משתמשים ב-BTK-8 לזיהוי, אז צריך לבצע את הפעולות הבאות: העבר 10 μL נוזל מצינור PCR לבאר שבב התגובה של BTK-8.צינור PCR אחד מתאים לבאר אחת בשבב.במהלך פעולת הפיפטה, ודא שהפיפטה היא ב-90 מעלות אנכית.יש למקם את קצות הפיפטה של מחסום האירוסול במרכז הבאר בכוח מתון ולהפסיק לדחוף את הפיפטה כשהיא מגיעה להילוך הראשון (כדי למנוע בועות).לאחר מילוי הבארות, הוציאו ממברנת שבב תגובה שתכסה את כל הבארות והשבב מועבר לאזור זיהוי ההגברה.
4. הגברת PCR (אזור זיהוי)
4.1 הכנס את צינורות ה-PCR/שבב התגובה לתוך מיכל התגובה והגדר את השמות של כל באר תגובה בסדר המתאים.
4.2 הגדרות הקרינה לזיהוי: (1) וירוס אבעבועות הקופים (FAM);(2) בקרה פנימית (CY5).
4.3 הפעל את פרוטוקול הרכיבה הבא
פרוטוקול של ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
| שלבים | טֶמפֶּרָטוּרָה | זְמַן | מחזורים | |
| 1 | טרום דנטורציה | 95℃ | 2 דקות | 1 |
| 2 | דנטורציה | 95℃ | 10 שניות | 45 |
| חישול, הארכה, רכישת פלואורסצנטיות | 60℃ | 30 שניות | ||
פרוטוקול של BTK-8:
| שלבים | טֶמפֶּרָטוּרָה | זְמַן | מחזורים | |
| 1 | טרום דנטורציה | 95℃ | 2 דקות | 1 |
| 2 | דנטורציה | 95℃ | 5 ש' | 45 |
| חישול, הארכה, רכישת פלואורסצנטיות | 60℃ | 14 ש' | ||
5. ניתוח תוצאות (נא לעיין במדריך למשתמש של המכשיר）
לאחר התגובה, התוצאות יישמרו אוטומטית.לחץ על "נתח" כדי לנתח, והמכשיר יפרש אוטומטית ערכי Ct של כל דגימה בעמודת התוצאה.תוצאות הבקרה השלילית והחיובית יתאימו ל"6. בקרת איכות".
6. בקרת איכות
6.1 בקרה שלילית: אין Ct או Ct>40 בערוץ FAM, Ct≤40 בערוץ CY5 עם עקומת הגברה רגילה.
6.2 בקרה חיובית: Ct≤35 בערוץ FAM עם עקומת הגברה תקינה, Ct≤40 בערוץ CY5 עם עקומת הגברה תקינה.
6.3 התוצאה תקפה אם מתקיימים כל הקריטריונים לעיל.אחרת, התוצאה לא חוקית.
פרשנות התוצאה
התוצאות הבאות אפשריות:
| ערך Ct של ערוץ FAM | ערך Ct של ערוץ CY5 | פרשנות | |
| 1# | אין Ct או Ct>40 | ≤40 | וירוס אבעבועות רוח שלילי |
| 2# | ≤40 | כל תוצאות | נגיף אבעבועות רוח חיובי |
| 3# | 40 ~ 45 | ≤40 | בדיקה חוזרת;אם זה עדיין 40~45, דווח כ-1# |
| 4# | אין Ct או Ct>40 | אין Ct או Ct>40 | לא חוקי |
הערה: אם מתרחשת תוצאה לא חוקית, יש לאסוף את המדגם ולבדוק שוב.
מידע על ההזמנה
| שם מוצר | חתול.לא | גודל | דוּגמָה | חיי מדף | עָבָר.& Sto.טמפ' |
| ערכת PCR בזמן אמת של וירוס קופים | B001P-01 | 48 מבחנים/ערכה | יציאת סרום/נגע | 12 חודשים | -25～-15℃ |
